質粒中提試劑盒是一種用于從大腸桿菌等細菌中快速、高效提取中量質粒DNA的試劑盒,適用于多數細胞轉染實驗、文庫篩選、體外翻譯等常規分子生物學操作。
質粒中提試劑盒操作步驟(以常見試劑盒為例)
細菌收集:取5-30ml過夜培養的菌液,加入離心管中,使用常規臺式離心機離心,盡量吸除上清。
細胞裂解:向有菌體沉淀的離心管中加入重懸液(如Solution I),懸浮細菌沉淀。然后加入裂解液(如Solution II),溫和地上下翻轉使菌體充分裂解。此時菌液應變得清亮粘稠。
中和與沉淀:加入中和液(如Solution III),立即溫和地上下翻轉充分混勻,此時將出現白色絮狀沉淀。離心后,將上清液轉移到吸附柱中。
DNA吸附與洗脫:將上清液加入吸附柱中,離心后棄廢液。然后加入漂洗液(如DNA Wash Buffer)進行漂洗,以去除殘留的雜質。最后,將吸附柱置于干凈的離心管中,加入洗脫緩沖液(如Elution Buffer)進行洗脫,收集質粒DNA溶液。